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技術文章

WB 化學發(fā)光成像儀操作步驟指南

WB 化學發(fā)光成像儀是生物學實驗里的得力助手,熟練掌握其操作步驟,能讓實驗事半功倍。下面就為大家梳理WB 化學發(fā)光成像儀關鍵操作步驟流程:

實驗前準備
儀器預熱:接通電源,打開化學發(fā)光成像儀開關,讓儀器預熱 15 - 30 分鐘。如同運動員上場前的熱身,預熱能使儀器達到穩(wěn)定工作狀態(tài),保障檢測精度。
檢查環(huán)境:確保操作環(huán)境清潔、干燥,室溫維持在適宜范圍,通常是 20 - 25℃ 。過濕、過熱或過冷的環(huán)境,都可能干擾儀器性能,影響成像效果。
準備樣本:提前完成蛋白質印跡(WB)實驗,將含有目的蛋白的 PVDF 膜或 NC 膜,用鑷子小心取出,去除多余的緩沖液,保證膜表面潔凈,避免雜質干擾后續(xù)成像。

樣本放置與參數(shù)設置
放置膜:打開成像儀暗箱,將處理好的膜平整放置于成像平臺中央,注意避免膜出現(xiàn)褶皺,不然會致使成像不均。輕輕合上暗箱,確保密封嚴實,防止外界光線進入。
參數(shù)設定:打開操作軟件,依據實驗需求與所使用的發(fā)光底物特性,調整曝光時間、靈敏度等關鍵參數(shù)。初次操作時,若拿捏不準,可先嘗試較短曝光時間,后續(xù)按需增加,以防過度曝光讓圖像丟失細節(jié)。靈敏度設置要適配目標蛋白的預估含量,含量低就調高些,反之亦然。

圖像采集與分析
采集圖像:點擊軟件中的 “開始采集” 按鈕,成像儀即刻捕捉膜上的化學發(fā)光信號,并轉化成數(shù)字圖像顯示于屏幕。采集過程保持安靜,勿晃動儀器,不然成像易模糊。
圖像優(yōu)化:倘若初次采集的圖像不夠理想,例如背景過亮、蛋白條帶不清晰,利用軟件自帶的對比度、亮度調節(jié)工具微調,凸顯目標條帶。
分析數(shù)據:運用軟件的定量分析功能,框選目標蛋白條帶,測量其灰度值、面積等數(shù)據,以此來對比不同樣本間蛋白表達量的差異,為實驗結論筑牢數(shù)據根基。

實驗收尾
關閉軟件:完成圖像采集與分析,先安全關閉操作軟件,避免數(shù)據丟失或軟件出錯。
關閉儀器:關掉成像儀電源開關,拔下插頭。清理暗箱,擦拭平臺,為下次實驗營造良好開端。

只要遵循上述步驟,就能順利駕馭 WB 化學發(fā)光成像儀,助力科研探索。
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