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實時熒光定量PCR技術在衛(wèi)生應急中的應用

實時熒光定量PCR技術（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR，如果用于RNA檢測，這被稱為逆轉錄實時PCR即Real-time RT-PCR）是實時PCR法，它是指對DNA或經(jīng)過反轉入（RT-PCR）的RNA通過聚合酶鏈式反應并實時監(jiān)測DNA的放大過程，在擴增的指數(shù)增長期就測量擴增產(chǎn)物，因為擴增指數(shù)增長期測量值與特異DNA（RNA）起始量存在相關性，從而實現(xiàn)定量檢測。

Real Time PCR的基本目標是測量和鑒別非常微量的特異性核酸，從而可通過監(jiān)測CT值而實現(xiàn)對原始目標基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規(guī)PCR方法如各種凝膠電泳PCR法，終點熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點PCR法。實時熒光定量PCR法大的點是克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差，實現(xiàn)DNA/RNA的定量。

普通PCR技術發(fā)明于1983年，而實時熒光定量PCR技術發(fā)明于上世紀九十年代并于1996年生產(chǎn)出了上第臺實時熒光定量PCR儀，實時熒光定量PCR技術得以實現(xiàn)的技術要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實時熒光定量PCR儀，我熒光定量PCR試劑盒研發(fā)實力強大，生產(chǎn)廠較多，臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能良、供應充足，基本實現(xiàn)產(chǎn)化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下，利用現(xiàn)有的試劑研發(fā)平臺，人感染豬流感實時熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會面世。實時熒光定量PCR儀由于技術含量，只有少數(shù)幾中企業(yè)有能力生產(chǎn)如西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL-988系列儀器不但取得了發(fā)明、科學技術獎、重點新產(chǎn)品證書、醫(yī)療器械注冊證，而且被發(fā)改委確立為技術產(chǎn)業(yè)化示范工程2008年生物醫(yī)學工程專項，產(chǎn)品性能達到一定水平，在乳品檢測行業(yè)市場占有率比進口儀器還[1-3]。實時熒光定量PCR儀應用廣泛，1999年開始，西方發(fā)達嘗試將PCR應用于臨床傳染病診斷、食品安全檢測以及血液篩查，目前已相當普及。2008年12月13日中衛(wèi)生部下發(fā)《衛(wèi)生應急隊伍裝備參考目錄》（衛(wèi)辦應急發(fā)[2008]207號），其中要求縣以上衛(wèi)生應急隊伍建設中必須配備PCR儀和實時熒光定量PCR儀作為傳染病控制類裝備。